本生選購指南：如何選擇PCR實(shí)驗(yàn)耗材?

　　關(guān)于其基因組的測(cè)序和信息分析，早在兩年前就由華大基因、浙江大學(xué)和中國科學(xué)院的科學(xué)家團(tuán)隊(duì)共同合作完成。后續(xù)功能的驗(yàn)證主要包括PCR檢測(cè)、ChIP、IP、IHC、IF、FISH等手段。而其中就簡單的方式就是PCR驗(yàn)證，那關(guān)于PCR實(shí)驗(yàn)有哪些影響因素呢?

　　我們一般想到的可能是獲取的DNA/RNA質(zhì)量、反轉(zhuǎn)錄的效率、引物的特異性乃至DNA聚合酶的保真度、擴(kuò)增長度等問題，但很少有人會(huì)想到耗材的選擇，可能也會(huì)影響您的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。那么關(guān)于PCR實(shí)驗(yàn)耗材我們改如何選擇呢?

　　首先需要明確的是我們做的是哪種PCR實(shí)驗(yàn)。根據(jù)檢測(cè)方法的不同，PCR實(shí)驗(yàn)分為普通PCR法和熒光定量PCR法，前者一般是終點(diǎn)PCR跑膠法測(cè)定，所以在選擇耗材時(shí)需要關(guān)注的主要是耗材本身的導(dǎo)熱性和密封性;而后者是實(shí)時(shí)檢測(cè)熒光信號(hào)，除了導(dǎo)熱性和密封性外，對(duì)透光性和避光性也有所要求。換句話而言，可以做熒光定量PCR的耗材一定可以來做普通PCR，反之，效果卻會(huì)差很多!

　　確定好了實(shí)驗(yàn)類型，我們就可以選擇耗材了，如前面所述，我們知道了密封性、導(dǎo)熱性、透光性、避光性等因素是我們需要關(guān)注的，那為什么要關(guān)注這些呢?

　　一、密封性

　　密封性越好，產(chǎn)物的揮發(fā)越少，得到的產(chǎn)物就越多同時(shí)氣溶膠的產(chǎn)生也越少，對(duì)于下一輪實(shí)驗(yàn)的污染也就越少，也就意味著假陽性的產(chǎn)生率越低。

　　二、導(dǎo)熱性

　　導(dǎo)熱性越好越均一，PCR的速度就越快，準(zhǔn)確度也越高。

　　三、透光性

　　這主要是對(duì)于熒光定量而言，我們知道它是一種實(shí)時(shí)定量的方式，那么耗材本身的透光性就直接關(guān)系到我們檢測(cè)到的熒光信號(hào)多少，如果選擇耗材透光性不足，本該檢測(cè)到的信號(hào)檢測(cè)不到，那就會(huì)造成我們對(duì)結(jié)果的誤判。

　　四、避光性

　　這也是針對(duì)熒光定量而言的，同上面的因素，如果我們?cè)谡麄€(gè)實(shí)驗(yàn)過程中沒注意避光，帶有熒光的試劑過度被消耗，那*直接就會(huì)影響我們實(shí)驗(yàn)的擴(kuò)增效率，導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果產(chǎn)生。

　　PCR單管

　　采用的一次注塑成型技術(shù)，超薄設(shè)計(jì)，熱傳導(dǎo)快，視窗比平面低，不易被劃擦，管子密封性更好，近乎零蒸發(fā)，減少了氣溶膠的污染，*大程度避免了假陽性的產(chǎn)生。熒光系列，蓋子高度透光，可適用于頂讀與低讀。

　　八聯(lián)管(適用普通PCR)

　　低于平面的高透視窗設(shè)計(jì)，可以*大程度避免被劃擦。100%進(jìn)口的原材料的使用使得管壁具有均一的平整和穩(wěn)定的不黏壁性，確保了樣品處理和吸取時(shí)的精準(zhǔn)度。

　　PCR板

　　不同于市面上其他廠家底部注塑的方式，注塑點(diǎn)是在板面上的孔與孔的交叉處，這樣使得PCR板的管底與PCR儀的接觸更好，同時(shí)采用純度高達(dá)99.9%的聚丙烯，超薄設(shè)計(jì)、壁厚一致均勻的工藝使得熱傳導(dǎo)精確、控溫準(zhǔn)確、有效減少了實(shí)驗(yàn)循環(huán)時(shí)間。

　　RNasin 能夠保護(hù)mRNA 的完整，有利于提高轉(zhuǎn)錄及翻譯的效率，同時(shí)避免了使用有機(jī)化合物抑制劑可能帶來的影響。

　　規(guī)格：30μl(40U/μl)

　　RNasin 是存在于人胎盤中的一種特異性核糖核酸酶(RNase)抑制劑其本質(zhì)是蛋白質(zhì)，分子量為51,000 Da，等電點(diǎn)pH值為4.7。

　　RNasin能夠特異地與RNase 以非共價(jià)鍵結(jié)合形成復(fù)合體從而使RNase 失活。RNasin在緩沖液為0-0.5M NaCl，pH5-8的條件下具有活性，pH7.8 時(shí)活性最高。

　　RNasin 能夠保護(hù)mRNA 的完整，有利于提高轉(zhuǎn)錄及翻譯的效率，同時(shí)避免了使用有機(jī)化合物抑制劑可能帶來的影響。

　　產(chǎn)品特點(diǎn)：

　　RNasin 能夠抑制真核生物的RNaseA、B、C 和人胎盤RNase 的活性。

　　該產(chǎn)品不抑制RNase H，S1核酸酶，SP6，T7 和T3RNA聚合酶，MV 或M-MLV 反轉(zhuǎn)錄酶，Taq DNA 聚合酶，

　　RNase T1，不影響后繼的反轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)翻譯過程。

　　緩沖體系需要有1 mM DTT 存在，活性pH 范圍寬廣。

　　產(chǎn)品應(yīng)用：

　　用在有潛在RNase 污染的地方。

　　在cDNA合成、體外轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)、翻譯系統(tǒng)中保護(hù)mRNA。

　　可以增加多核糖體的活性、產(chǎn)量;利于病毒的體外復(fù)制。

　　用于制備無RNase 的蛋白產(chǎn)品，如抗體。

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